由于各種抗原成份，包括小分子的半抗原，ELISA試劑盒均可用以制備特異性的抗血清或單克隆抗體，利用此抗體作為試劑就可檢測標本中相應(yīng)的抗原，因此免疫測定的應(yīng)用范圍極廣，在臨床檢驗中可用于測定：
1) 體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2) 激素，包括小分子量的甾體激素等。
3) 抗生素和藥物。
4) 病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5) 另外，也可利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等。
5．標記的免疫測定
如上所述，免疫測定是一種很敏感的測定方法，抗原抗體反應(yīng)后直接測定形成的沉淀或濁度，敏感度可達5~10μg/ml，但在臨床檢驗中，某些待測物在標本中的含量遠低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。標記的免疫測定是將檢測試劑中的抗原或抗體用可微量測定的物質(zhì)加以標記，通過測定標記物來提高敏感度。在放射免疫測定和中，ELISA試劑盒標記物分別為放射性核素和酶，zui后用測定放射性和酶活力來計算待檢物的量，敏感度可比直接測定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標記免疫測定中，一般加入過量的標記試劑以保證與待測物*反應(yīng)。以標記抗體（Ab ※）檢測抗原（Ag）為例，反應(yīng)式如下：
Ag+ Ab※ →AgAb※+Ab※
在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※ ，如不將兩者分離而測定標記物，測得的結(jié)果將為兩者之和。因此，游離標記物與結(jié)合標記物的分離是標記免疫測定中的重要步驟?？刹捎枚喾N手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗體包被在固相載體上，然后再與標記的抗原或抗體直接反應(yīng)，結(jié)合的標記物被固定在載體上，而游離的標記物留于溶液中。這樣可以通過洗滌將游離的Ab※除去，結(jié)合標記物的測定可在固相上進行。IgM抗體一般為保護性抗體具有免疫性。因此IgM抗體的測定，對某些傳染病如甲型肝炎有較高的臨床診斷價值。
1.3 抗原抗體反應(yīng)
1.3.1 可逆性
抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以用平衡常數(shù)K表示：
K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]
高親和力抗體的抗原結(jié)合點與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離。解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，ELISA試劑盒因此可用親和層析法來提純抗原或抗體。在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層析純抗體，應(yīng)用于免疫測定中可得到更好的效果。
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