今天上班時(shí)，公司接到一位elisa實(shí)驗(yàn)朋友的，說雖然之前參考了大量的文獻(xiàn)，但是在準(zhǔn)備做的時(shí)候還是有一點(diǎn)不知所錯(cuò)，想請(qǐng)我們幫他歸納一下。
其實(shí)做elisa實(shí)驗(yàn)并不困難，只要掌握了它的技術(shù)要點(diǎn)，新手朋友也可以做出的elisa實(shí)驗(yàn)的。下面是我司技術(shù)專員歸納的實(shí)驗(yàn)技術(shù)要點(diǎn)，大家一起來看看吧。
1. 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機(jī)等；
2. 根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量；
3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑；
4. 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者，注意低溫保存。
實(shí)驗(yàn)中為了確定*信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測(cè)抗體（0.25-2μg/ml）在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。
標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml?？衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
為了優(yōu)化靈敏度，建議過一夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
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